ADN Recombinante y β-talasemia

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Se han desarrollado terapias génicas para β-talasemia, basadas en la corrección del gen de la β-globina y de los LCR del gen, para ello se han empleado vectores lentivirales (HIVd) en células hematopoyéticas indiferenciadas, reportándose la corrección del fenotipo mutado.

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Los vertebrados presentan un tipo de recombinación genética denominada V(D)J, en la que se corta y empalma segmentos no contiguos de inmunogloblina en el genoma para generar repertorios de genes codificantes de anticuerpos y proteínas receptoras de antígenos.

Tomado de:

1. https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2319417016000172

2. https://www.cell.com/cell/pdf/S0092-8674(15)01411-7.pdf

Secuenciación directa del gen de la β-globina para el diagnóstico molecular de β-talasemia.

Tomado de: https://slideplayer.es/slide/3117781/11/images/13/Secuenciaci%C3%B3n+de+DNA+M%C3%A9todo+de+Sanger+automatizado.jpg

La secuenciación Sanger es el método más práctico que se usa actualmente para la detección de mutaciones en un individuo, además en los últimos años se ha logrado automatizar el proceso permitiendo un reducción en los costos. Esta prueba posibilita el análisis exacto de la secuencia que presenta la mutación y además de ellos facilita la identificación de mutaciones que son desconocidas hasta el momento.

Tomado de:

1. https://onlinelibrary.wiley.com/doi/pdf/10.1111/ijlh.12527

Prueba de Reacción en Cadena de la Polimerasa aplicada a la β-talasemia

Tomado de: http://www.iacld.ir/DL/article/detectionofeightcommonglobingenemutationinthalassemiamajorpatientsusingrealtimepolymerasechainreactionpcrhighresolutionmeltingandevagreendye.pdf

Título: Detección de ocho mutaciones comunes de genes de β-globina en pacientes con β-talasemia mayor usando la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real de alta resolución de fusión y colorante EvaGreen™.

Objetivo: Determinar la frecuencia de genotipo y fenotipo de las mutaciones más comunes de la β-globina en pacientes con talasemia mayor, usando análisis de alta resolución de fusión junto al PCR en tiempo real.

Muestra biológica: Sangre.

Ácidos Nucleicos: ADN genómico extraído mediante el kit de extracción AccuPrep® Genomic DNA.

Genes: Se usaron 8 amplicones; IVS-II-1, IVS-I-110,  IVS-I-5,  FSC 8/9,  FSC 36/37,  Codon 30,  IVSI-6, IVS-I-1.

Tipo de PCR: PCR en tiempo real, con análisis de alta resolución de fusión.

Pasos de la PCR: 35 ciclos;

                              D: 94 °C x 1 min

                              H: Temperatura variable dependiente de cada mutación x 1 min

                              E: 1) 72 °C x 1 min; 2) 72 °C x 5 min

Visualización: Curva de análisis de de alta resolución de fusión.

Tomado de: 

1. http://www.iacld.ir/DL/article/detectionofeightcommonglobingenemutationinthalassemiamajorpatientsusingrealtimepolymerasechainreactionpcrhighresolutionmeltingandevagreendye.pdf

Pruebas diagnóstico confirmatorio de la β-talasemia

Tomado de: https://academic.oup.com/ajcp/article/148/1/6/3866692

La primera prueba confirmatoria es la electroforesis de hemoglobina en la que se muestra una concentración elevada de hemoglobina A2, con hemoglobina fetal normal, sugiriendo un cuadro positivo. La segunda prueba consiste en una cromatografía líquida de alta presión que permite separar los tipos de hemoglobinas por un mecanismo de atracción catiónica por tanto, concentraciones anormales de alguna de ellas facilitan un diagnóstico. Una prueba de tamizaje es el NESTROFT que ha demostrado ser útil para detectar el fenotipo. 

Tomado de: 

1. http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-29572017000300003

2. https://academic.oup.com/ajcp/article/148/1/6/3866692
3. https://link.springer.com/article/10.1007/s40556-015-0040-4