domingo, 11 de noviembre de 2018

Prueba de Reacción en Cadena de la Polimerasa aplicada a la β-talasemia


Título: Detección de ocho mutaciones comunes de genes de β-globina en pacientes con β-talasemia mayor usando la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real de alta resolución de fusión y colorante EvaGreen™.
Objetivo: Determinar la frecuencia de genotipo y fenotipo de las mutaciones más comunes de la β-globina en pacientes con talasemia mayor, usando análisis de alta resolución de fusión junto al PCR en tiempo real.
Muestra biológica: Sangre.
Ácidos Nucleicos: ADN genómico extraído mediante el kit de extracción AccuPrep® Genomic DNA.
Genes: Se usaron 8 amplicones; IVS-II-1, IVS-I-110,  IVS-I-5,  FSC 8/9,  FSC 36/37,  Codon 30,  IVSI-6, IVS-I-1.
Tipo de PCR: PCR en tiempo real, con análisis de alta resolución de fusión.
Pasos de la PCR: 35 ciclos;
                              D: 94 °C x 1 min
                              H: Temperatura variable dependiente de cada mutación x 1 min
                              E: 1) 72 °C x 1 min; 2) 72 °C x 5 min
Visualización: Curva de análisis de de alta resolución de fusión.

Tomado de: 


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